一、背景介绍
克隆形成实验是研究细胞存活率并探讨单个细胞增殖潜能的有效方法之一。即在体外培养环境下，通过使单个细胞经过连续分裂增殖至少6代，形成的细胞集群被称为克隆或集落。每个克隆的尺寸通常在0.3-1.0mm之间，含有50个以上的细胞。通过计算克隆形成率，能够对单个细胞的增殖潜力进行量化分析。
用途：
（1）评估细胞增殖能力：克隆形成实验可以帮助研究人员评估细胞的增殖潜力。通过观察和计数形成的独立克隆，可以了解细胞在体外环境中的增殖速率和能力。
(2)研究细胞群体依赖性：克隆形成实验有助于了解细胞的群体依赖性，即细胞是否需要相互合作形成克隆。这对于理解细胞群体内的相互作用和细胞信号传导至关重要。
(3)筛选药物和治疗方案：克隆形成实验可用于评估药物对细胞增殖的影响。通过在实验前后比较克隆形成率，研究人员可以评估潜在药物或治疗方案的疗效。
常用的手段有两个：
①平板克隆形成实验：通过将细胞培养于培养基中，主要适用于贴壁生长的细胞，以评估细胞的克隆形成能力。
②软琼脂克隆形成实验：通过将细胞悬浮于含琼脂糖的培养基中，主要用于评估贴壁和悬浮的肿瘤细胞或转化细胞系的克隆形成潜能。
二、平板克隆形成实验的实验步骤
(1) 从细胞处于对数生长期状态开始，通过胰酶消化将细胞悬浮于血清培养基中，并进行准确计数；
(2) 在每个实验组中，控制细胞数量在400-1,000个细胞/孔的范围内（对于不同的细胞类型，需要进行预实验以确定最佳细胞数量），并接种于6孔板；
(3) 持续培养至14天，或直到大多数单个克隆中的细胞数超过50个。在培养过程中，每隔3天更换培养基，并观察细胞状态；
(4) 克隆形成完成后，使用1 mL 4%多聚甲醛进行细胞固定，固定时间为15-30分钟。最后，用PBS洗涤；
(5) 向每个孔中加入1 mL结晶紫染液，染色时间控制在10-20分钟内；
(6) 利用PBS进行多次细胞洗涤，进行拍照（分别对整个六孔板及每个孔进行单独拍照）。
注意：本实验的成功关键在于细胞悬液的制备和适度的接种密度，务必确保细胞均匀分散，防止细胞团的形成，并谨慎确保接种密度不过于密集。
以上就是本期的内容，更多资讯，欢迎点击安培生物网站链接了解更多技术与产品资讯。
安培生物致力成为推动生命科学进步值得信赖的合作者
深圳/湛江安培生物科技有限公司,是一家具有核心的技术实力、先进的经营管理水平和完善的市场销售体系的生物高科技企业。总部设在广东，服务面向全国。安培生物集进口试剂、实验室耗材销售、技术服务与合约开发为一体的专业化高科技公司，旨在为生命科学的发展提供较好的产品与服务。本公司建立了涵盖分子生物学、细胞生物学、免疫学、信号传导和神经科学等领域的产品供应线，在各个领域内向用户提供较高的水平和质量稳定的产品，安培生物致力于为广大的科研机构、高等院校等客户提供各种产品、技术支持与服务。
可以在第一时间为用户提供比较先进的专业资讯和完备的产品和物流服务。专业的技术力量使得我们能够为广大用户提供强大的技术支持，深厚的人脉资源使得我们在全国主要城市拥有众多的合作伙伴，安培生物非常荣幸能将世界上先进的高科技产品推荐给国内从事生物学领域科研的老师和同仁。作为专业性的产品供应商，公司出资存备了大量现货，配合优秀的销售队伍以及专业的技术支持，随时为客户提供服务。
本文地址： https://www.xsyiq.com/57257.html
网站内容如侵犯了您的权益，请联系我们删除。
